木瓜蛋白酶是從番木瓜漿中提取的一種植物來(lái)源蛋白酶，具有酶活高、熱穩(wěn)定性好、可應(yīng)用于肉類嫩化、嫩肉粉、大豆肽、肉類水解、膠原蛋白肽、酵母抽提物生產(chǎn)中，是一種廣譜性的蛋白水解酶。精準(zhǔn)的酶活力檢測(cè)，可以減少因酶活波動(dòng)造成的產(chǎn)品質(zhì)量波動(dòng)，降低生產(chǎn)成本，同時(shí)有助于監(jiān)控生產(chǎn)環(huán)節(jié)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題，因此，掌握好木瓜蛋白酶酶活力測(cè)定檢測(cè)方法是必不可少的一個(gè)環(huán)節(jié)。

木瓜蛋白酶活力檢測(cè)原理 
木瓜蛋白酶在一定的溫度與PH條件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸終止酶反應(yīng)， 并將未水解的酪蛋白沉淀除去，濾液對(duì)紫外光有吸收，可用紫外分光光度法測(cè)定，根據(jù)吸光 度計(jì)算其酶活力。

木瓜蛋白酶酶活定義 
在一定溫度（40℃）和 pH 6.0條件下，1min 水解酪蛋白產(chǎn)生 1μg酪氨酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位，以U/G表示。

酶活檢測(cè)的儀器與設(shè)備
1、恒溫水浴鍋：精度為40土0.1℃。 
2、紫外分光光度計(jì) 波長(zhǎng)275nm
3、漩渦混合器
4、電子天平(0.001g) 

木瓜蛋白酶酶活力檢測(cè)恒溫水浴設(shè)備

酶活檢測(cè)試劑和溶液 
1、0.05 mol/L磷酸氫二鈉溶液 
稱取17.9g十二水磷酸氫二鈉溶于水中，稀釋到1000mL。 

3、0.05mol/L檸檬酸溶液 
稱取10.5g一水檸檬酸溶于水中到1000mL。 

4、酪蛋白溶液 
稱取1g干酪素（酪蛋白），加到80mL 0.05mol/L磷酸氫二鈉溶液中（溶液3.1），在沸水 
浴中加熱并不時(shí)攪拌，至完全溶解，冷卻到室溫，并加入0.05mol/L檸檬酸調(diào)到pH＝6.0。在 加入檸檬酸時(shí)要迅速攪拌，防止蛋白局部凝聚。然后以水定容到100mL。當(dāng)天配制。 

5、磷酸鹽—半胱氨酸EDTA緩沖溶液 
稱取8.95g十二水磷酸氫二鈉以400mL水溶解，加入7.0gEDTA－Na鹽（乙二胺四乙酸二鈉） 
和3.05g半胱氨酸鹽酸鹽一水化物溶解后，以１mol/L氫氧化鈉／HCL調(diào)節(jié)pH6.0并定容至 
500mL。冰箱4℃保存三天。
 
6、0.4mol／L三氯乙酸（CCl3C00H）溶液，稱取65.4g三氯乙酸，用水溶解并定容至l000mL。 

7、0.1mol／L鹽酸溶液 吸取9mL鹽酸，用水溶解并定容至1000mL即得。 

8、50μg/mL L－酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液： 精確稱取預(yù)先在105℃干燥至恒重的L-酪氨酸0.05g（±0.001g）置于1000mL容量瓶中；用0.1mol／L鹽酸（3.6）溶解并稀釋至刻度，成為每mL含酪氨酸50μg的標(biāo)準(zhǔn)液。

紫外分光光度計(jì)

木瓜蛋白酶酶活檢測(cè)方法
1、精確稱取1.000g樣品至50mL的試管中，加磷酸鹽半胱氨酸EDTA緩沖液（3.4）24mL，于漩渦混合器中震蕩3-4次至完全溶解，浸提10min后，中速定性濾紙過(guò)濾，取上清液用上述緩沖液（3.4）稀釋到適當(dāng)倍數(shù)待測(cè)。稀釋倍數(shù)為估計(jì)酶活除以10，使吸光度值接近As。 

2、取試管二支，分別吸取 2.0mL 酶液于其中，在 40±0.1℃水浴中預(yù)熱 5 分鐘，其中一 
支加入同時(shí)預(yù)熱的酪蛋白（3.3）溶液 2mL，混勻，40±0.1℃準(zhǔn)確反應(yīng) 10min 后，加入 4mL 
三氯乙酸溶液（3.5）終止反應(yīng)，搖勻，取出靜置 10min，用中速定性濾紙過(guò)濾，若濾液不 
清澈需再過(guò)濾，以水作空白，記錄在 275nm 波長(zhǎng)處用紫外分光光度計(jì)測(cè)定的濾液吸光度值 
AE。 

3、空白制作：吸取 2.0mL 酶液，先加入 4.0mL 三氯乙酸溶液（3.5）使酶滅活，10min 后 
加酪蛋白溶液（3.3）2.0mL 搖勻，取出靜置 10min 中速定性濾紙過(guò)濾，按上述法測(cè)得吸光 

度 AS。 同時(shí)測(cè)定酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液（3.7）在 275nm 波長(zhǎng)處的吸光度為 A0。 

木瓜蛋白酶檢測(cè)報(bào)告

以上是小編分享木瓜蛋白酶酶活力檢測(cè)方法，除了掌握上述檢測(cè)方法外，精準(zhǔn)的檢測(cè)還得需要專業(yè)的檢測(cè)設(shè)備、熟練的手法及專業(yè)檢測(cè)人員，如果您不具備上述幾個(gè)條件，可以把酶活力檢測(cè)交給我們完成，我們擁有豐富的檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，完全可以滿足精準(zhǔn)苛刻的檢測(cè)需求。

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